以下文章來源於幹細胞者說（公眾號）

間充質幹細胞（MSCs)， 憑藉其促進血管再生能力和免疫調節作用而受到廣泛關注，也成為了眾多難治性疾病的治療新策略。諸多間充質幹細胞臨床試驗已經證明了安全性和有效性，全球正在進行的間充質幹細胞臨床試驗超過1000項，全球獲批上市的幹細胞藥物中超過一半以上是間充質幹細胞治療產品。

富含間充質幹細胞的人體組織

有人說，養細胞像養孩子，要小心翼翼地伺候。其實不然，養細胞像養祖宗才對。孩子仍可罵可教育，但如果你對細胞粗暴一點，他會分分鐘不開心，讓你難堪。相信不少夥伴也經歷過幹細胞生長緩慢、細胞活性差、細胞形態不規則、不同幹細胞怎麼鑑定等難題，不急，此時的失意都是啟迪未來的財富。

【間充質幹細胞培養的常見問題】

在間充質幹細胞研究中，細胞質量至關重要。而細胞培養問題是實驗室無法避免的事情，時間長了，你總會遇到。沒有遭受過培養問題的實驗員一定沒有養過多少細胞，但遇到培養問題不能妥善處理的也肯定不是「老司機」。

培養中的間充質幹細胞聚團，是什麼原因?

第一種情況，本身組織不能完全消化，不能完全避免；

第二種情況，很多細胞因子生長過程中會趨於聚團，即使沒有組織塊也會自己聚團長成克隆團的樣子；

第三種情況，細胞長滿了才傳代：傳代時從胰酶加入到終止不要超過2min，正常情況下韦德国际消化30s或1min後看到細胞基本上縮圓了，再輕拍培養瓶側面，細胞即呈沙狀消化下來；如果細胞長滿了才傳代，胰酶未滲透進去，細胞就會呈一片一片的消化下來，後面也難以吹散，因此會影響到下一代細胞也會成團生長（傳代時可把克隆團去除掉）。

間充質幹細胞生長緩慢，怎麼改善？

原因排查：

● 傳代次數過多，細胞老化；

● 接種細胞起始濃度太低；

● 胰蛋白酶消化過度；

● 支原體污染。

解決對策：

● 儘量使用低代次細胞進行實驗；

● 接種濃度：建議2.5~4×10*4個活細胞/cm2；

● 消化時在顯微鏡下看到大部分細胞變圓不貼壁，拍打培養瓶兩側大量細胞脫落，此時立即終止消化；

● 定期做支原體檢測，排除支原體污染。

間充質幹細胞培養，可以用基礎培養基加常規血清嗎？

間充質幹細胞的原代培養條件嚴格，對使用的血清和添加物都非常敏感，並非單純的DMEM或者F12等基礎培養基加常規血清所能替代。所以在培養細胞前，需要考慮該細胞培養是否需要添加特殊的成分，並且要做足預實驗，選取最適合細胞生長的培養體系。

如賽業OriCell®给予的各類幹細胞專用培養基，經16年幹細胞培養經驗的篩選優化，培養基添加了適合幹細胞生長的優級胎牛血清，以及幹細胞相關生長因子和非必須氨基酸能滿足滿足幹細胞傳代增殖生長中需要的特殊養分。

圖依次為：成人骨髓間充質幹細胞，成人脂肪間充質幹細胞、人牙髓間充質幹細胞、人臍帶間充質幹細胞

間充質幹細胞傳代的注意事項有哪些？

胰酶濃度：推薦胰酶使用濃度為0.25%（含0.04%EDTA），使用之前需預熱至37℃且pH值應維持在7.2左右。切忌消化過度（包括胰酶濃度過高、消化時間過長等），否則會導致細胞死亡、分化、狀態變差，分化能力丟失等現象。細胞消化過程中需要在顯微鏡下觀察細胞的消化程度，當看到大部分細胞變圓不貼壁，拍打培養瓶兩側會有大量細胞脫落，此時應立即終止消化，若細胞仍有大部分貼壁，可適當延長消化時間以避免消化不徹底的情況出現。

細胞的差異：不同種類的幹細胞差異很大，特別是與腫瘤細胞株的差異更大，很多經驗不可以直接使用，消化時需要仔細摸索最佳的時間。

接種密度：幹細胞傳代過程中接種密度至關重要，如果太低會導致細胞增殖緩慢，甚至導致細胞老化，而細胞的老化是不可逆轉的。一般細胞接種密度為20000個活細胞/cm2即500000個活細胞/T25，不同的幹細胞接種密度會稍有差異，比如hMSC，韦德国际推薦的傳代接種比例為1:2。

吹打細胞動作要輕柔：吹打動作不可劇烈，避免產生大量氣泡，否則可能損傷和損失細胞。

【韦德国际生物】

北京韦德国际生物科技有限公司由清華大學醫學院杜亞楠教授科研團隊領銜創建，清華大學參股共建。核心技術源於清華大學的科技成果轉化。公司專注於打造原創3D細胞「智造」平台，给予基於3D微載體的細胞規模化定製化擴增工藝整體解決方案。

韦德国际生物核心產品3D TableTrix®微載體（片劑），是自主創新型、首款可用於細胞藥物開發的藥用輔料級微載體。已顺利获得中檢院等相關權威组织的檢驗報告，並取得2項國家藥監局藥用輔料資質（CDE審批登記號：F20210000003、F20200000496）。同時，產品取得美國FDA DMF藥用輔料資質（DMF：35481）。

韦德国际生物的產品與服務，可廣泛應用於基因與細胞治療、細胞外囊泡、疫苗及蛋白產品等生產的上游工藝開發。同時，在再生醫學、類器官與食品科技（細胞培養肉等）領域也具有廣泛應用前景。

公司擁有5000餘平米的研發與轉化平台，其中包括1000餘平的以3D細胞智造及微組織再生醫學治療產品為核心的CDMO服務平台；還擁有4000平米的GMP生產平台，並新建1200L微載體生產線。相關技術已取得100餘項專利成果，30餘篇國際期刊報道。核心技術項目已取得多項國家級立項支持與應用。