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本周hzangs在最新文獻中選取了10篇分享給大家，第1篇文章介紹了細胞外囊泡劑量對細胞反應的影響；第2篇文章介紹了一種血漿細胞外囊泡蛋白分析的策略；第4篇文章介紹了M2型巨噬細胞來源囊泡對腫瘤免疫的影響；第10篇文章介紹了聲波控制的細胞外囊泡離心分離策略。 

1.The cellular response to extracellular vesicles is dependent on their cell source and dose. 

細胞對細胞外囊泡的反應取決於其細胞來源和劑量

[Sci Adv] PMID: 37656796

摘要：細胞外囊泡（EV）已被證實在細胞間通訊中發揮重要作用，並顯示出作為治療劑的前景。然而，韦德国际仍然缺乏對細胞在接觸不同劑量的不同細胞來源的 EV 時如何反應的基本分析。因此，韦德国际用來自 12 種不同細胞來源的 EV 處理成纖維細胞，每個細胞的劑量在 20 至 200,000 個之間，分析了它們的轉錄效應，並使用單細胞 RNA 測序在體外和體內的各種細胞類型中功能性地證實了這些發現。無偏見的整體分析顯示，EV劑量比細胞來源具有更顯着的影響，因此高劑量會下調胞吐作用並上調溶酶體活性。然而，在低劑量下觀察到 EV 細胞源特異性反應，這些反應反映了 EV 源細胞的活性。最後，韦德国际評估了 EV 衍生的轉錄本豐度，發現免疫細胞衍生的 EV 與受體細胞最相關。總之，這項研究為細胞對EV的反應给予了重要的見解。

2. Profiling extracellular vesicle surface proteins with 10 µL peripheral plasma within 4 h. 

在 4 小時內使用10 mL外周血漿分析細胞外囊泡表面蛋白

[J Extracell Vesicles] PMID: 37654045

摘要：原發腫瘤表達的細胞外囊泡（EV）表面蛋白是早期癌症診斷的重要生物標誌物。然而，這些 EV 蛋白的檢測由於其豐度低且受到臨床樣本中非 EV 成分的干擾而變得複雜。在此，韦德国际提出了一種膜特異性分離和兩步級聯擴增(MESS2CAN) 策略，可在 4 小時內直接檢測 EV 表面蛋白。MESS2CAN 利用新型脂質探針（一端由 PEG2K 與生物素連接的長鏈，另一端與 DSPE 相連）和鏈霉親和素包被的磁珠，可在 1 小時內取得 49.6% 的 EV 回收率。然後，採用由 Cas12a 系統級聯的引物交換反應 (PER) 的雙重擴增策略，可以以每微升 10 個 EV 顆粒靈敏地檢測目標蛋白。使用 4 個細胞系和 90 個臨床測試樣本，韦德国际演示了 MESS2CAN 用於分析源自細胞和患者血漿的 EV 上的 HER2、EpCAM 和 EGFR 表達。MESS2CAN 報告了 EGFR (AUC = 0.98) 和 HER2 (AUC = 1) 所需的特異性和敏感性，用於區分 HER2 陽性乳腺癌、三陰性乳腺癌和健康捐贈者。MESS2CAN 是一種高靈敏度體外 EV 診斷的開創性方法，適用於含有微量 EV 的臨床樣本。

3.A Novel Superparamagnetic Multifunctional Nerve Scaffold: Remote Actuation Strategy to Boost in situ Extracellular Vesicles Production for Enhanced Peripheral Nerve Repair. 

新型超順磁性多功能神經支架：遠程驅動策略促進原位細胞外囊泡產生，增強周圍神經修復

[Adv Mater] PMID: 37652460

摘要：細胞外囊泡（EV）在再生醫學中比基於細胞的療法具有固有的優勢，因為它們含有豐富的生物活性線索。提出了幾種策略來調整體外EV的生產。然而，在體內操縱 EV 的產生仍然是一個挑戰，這給旨在促進組織再生的基於 EV 的療法帶來了重大困難，特別是對於周圍神經病變等疾病的長期治療。在此，顺利获得將聚乙二醇/聚乙烯亞胺修飾的超順磁性納米顆粒摻入聚丙烯酰胺/透明質酸雙網絡水凝膠（Mag-gel）中，構建了能夠按需控制EV生產的超順磁性納米複合支架。Mag-gel 對旋轉磁場 (RMF) 高度敏感，可以作為機械刺激平台，對封裝的雪旺細胞 (SC) 施加微/納米級的力，雪旺細胞是支持神經再生的重要神經膠質細胞。顺利获得切換 RMF 的開/關狀態，Mag-gel 可以在體外和體內擴大 SC 衍生的 EV（SC-EV）的本地生產。進一步的轉錄組測序表明，使用 RMF 的 Mag-gel 中SC-EV 的軸突生長、血管生成和炎症調節中的轉錄物富集，最終導致體內神經修復的優化。總體而言，韦德国际的研究给予了一種無創且遠程定時的方法，用於微調基於 EV 的療法，以加速組織再生，包括周圍神經的再生。

4.METTL3 inhibition induced by M2 macrophage-derived extracellular vesicles drives anti-PD-1 therapy resistance via M6A-CD70-mediated immune suppression in thyroid cancer. 

M2巨噬細胞衍生的細胞外囊泡誘導的METTL3抑制顺利获得M6A-CD70介導的甲狀腺癌免疫抑制驅動抗PD-1治療耐藥

[Cell Death Differ] PMID: 37648786

摘要：標準療法難治的晚期甲狀腺乳頭狀癌（PTC）和未分化甲狀腺癌（ATC）的治療選擇有限。儘管抗 PD-1 療法具有可控的安全性，並且對一小部分晚期 PTC 和難治性 ATC 患者有效，但大多數患者要麼對抗 PD-1 療法沒有反應，要麼產生耐藥性。N6-甲基腺苷 (m6A) 修飾是腫瘤微環境 (TME) 複雜性的關鍵決定因素。然而，尚不清楚腫瘤細胞中的 m6A 修飾是否以及如何影響 PTC 和 ATC 的免疫景觀。在這項研究中，韦德国际對 PTC 和 ATC 組織進行了批量和單細胞 RNA 測序分析，發現低 METTL3 表達不僅與免疫檢查點阻斷 (ICB) 反應不佳相關，而且還與 TNF 家族相關配體增加相關。免疫抑制性 Tregs 和耗盡的 T 細胞中的受體相互作用。此外，在外周血單核細胞人源化NCG（huPBMC-NCG）小鼠模型中，PTC和ATC細胞中METTL3的過度表達增強了抗PD-1治療的療效。從機制上講，M2巨噬細胞衍生的細胞外囊泡（M2 EV）顺利获得miR-21-5p抑制PTC和ATC細胞中METTL3的表達。METTL3 的下調促進了 CD70 mRNA 的去甲基化，從而阻止了 YTHDF2 介導的轉錄本降解。CD70 mRNA 的穩定以及隨後 CD70 蛋白水平的上調增加了免疫抑制性 Tregs 和最終耗盡的 T 細胞的豐度，從而誘導對抗 PD-1 治療的抵抗。此外，使用高親和力單克隆抗體 cusatuzumab 阻斷 CD70，可逆轉 M2 EV 體內誘導的抗 PD-1 治療耐藥性。最後，韦德国际證明 METTL3 表達與 PTC 和ATC 組織中 CD70 表達以及 M2 巨噬細胞和Tregs 浸潤呈負相關。韦德国际的研究結果為開發先進 PTC 和 ATC 的新療法给予了新的見解。

5.Engineered Extracellular Vesicle-Delivered CRISPR/Cas9 for Radiotherapy Sensitization of Glioblastoma. 

工程細胞外囊泡遞送的 CRISPR/Cas9 用於膠質母細胞瘤放射治療增敏

[ACS Nano] PMID: 37646615

摘要：放射治療是膠質母細胞瘤（GBM）治療的主要手段；然而，治療耐藥性的开展阻礙了放療的療效，表明需要額外的治療策略。在這裏，在接受放射治療的小鼠原位腫瘤中進行了體內功能喪失全基因組 CRISPR 篩選，以鑑定與放射治療相關的合成致死基因。顺利获得功能篩選和轉錄組分析，發現谷胱甘肽合成酶（GSS）是顺利获得鐵死亡來調節放射抗性的潛在調節劑。高GSS水平與膠質瘤患者的不良預後和復發密切相關。機制研究表明，GSS 與抑制放射治療誘導的神經膠質瘤細胞鐵死亡有關。GSS 的消耗導致谷胱甘肽 (GSH) 合成的破壞，從而導致 GPX4 失活和鐵積累，從而增強放射治療時鐵死亡的誘導。此外，為了克服 CRISPR 編輯廣泛治療轉化的障礙，韦德国际報告了一種基於EV的基因組編輯傳遞系統，不僅靶向血腦屏障（BBB）和GBM，而且還可以滲透BBB並穿透腫瘤。韦德国际的封裝 EV 顯示出 GBM 組織靶向的令人鼓舞的跡象，這導致 GBM 中的 GSS 基因編輯效率很高（高達 67.2%），脫靶基因編輯可以忽略不計。這些結果表明，結合公正的基因篩選和基於CRISPR-Cas9 的基因治療對於識別潛在的合成致死基因以及擴展治療靶點是可行的。

6.Accurate and Convenient Lung Cancer Diagnosis through Detection of Extracellular Vesicle Membrane Proteins via Förster Resonance Energy Transfer. 

顺利获得福斯特共振能量轉移檢測細胞外囊泡膜蛋白，準確便捷地診斷肺癌

[Nano Lett] PMID: 37643406

摘要：腫瘤來源的細胞外囊泡（EV）有望監測早期癌症。不幸的是，從患者的液體活檢中分離和分析 EV 具有挑戰性。為此，韦德国际設計了一種基於適體量子點和AIEgen染料之間的Förster共振能量轉移（FRET）信號的EV膜蛋白檢測系統（EV-MPDS），該系統消除了EV的提取和純化步驟，從而方便地診斷肺癌。在 80 個臨床樣本的隊列中，與 ELISA 檢測方法相比，該系統在癌症診斷方面顯示出更高的準確性（100% 與 65%）和靈敏度（100% 與 55%）。顺利获得使用機器學習分析系統全面分析五種生物標誌物，提高了早期篩查的準確性（從 96.4% 提高到 100%）。因此，基於 FRET 的腫瘤 EV-MPDS 是一種免分離、低體積 (1 µL) 且高度準確的方法，為幫助肺癌診斷和早期篩查给予了潛力。

7.Precise Identification and Profiling of Surface Proteins of Ultra Rare Tumor Specific Extracellular Vesicle with Dynamic Quantitative Plasmonic Imaging. 

利用動態定量等離激元成像精確鑑定和分析超罕見腫瘤特異性細胞外囊泡的表面蛋白

[ACS Nano] PMID: 37638659

摘要：血漿中腫瘤源性 EV（tEV）的特異性檢測因非腫瘤EV 和非 EV 顆粒而變得複雜。直接用臨床血漿準確識別tEV 並以單 tEV 解像度分析其表面蛋白表達仍然是一個未滿足的需求。在這裏，韦德国际提出了一種用於單個 tEV 表面蛋白分析 (DISEP) 的動態免疫分析，這是一種基於表面等離子共振顯微鏡 (SPRM) 的動力學分析，用於特定的單個 tEV 分析。DISEP採用一對低親和力寡核苷酸探針分別標記EV表面蛋白並對SPRM生物傳感器接口進行功能化。用寡核苷酸探針標記的 tEV 具有與血漿中非特異性顆粒獨特的結合動力學，這允許對單個 EV 進行精確的數字計數。韦德国际證明了 DISEP 能夠以高靈敏度（每微升 4677 個 EV）識別 350 倍背景顆粒中的目標 EV。對臨床血漿樣本進行分析，以區分胰腺癌患者 (n = 40) 和健康捐獻者 (n = 45)。憑藉一組生物標誌物特徵（EpCAM、HER2 和 GPC1），DISEP 僅需要每個供體的 10 μL 初級樣本即可對曲線下面積為0.98 的腫瘤患者進行分類。DISEP 為早期癌症診斷给予高度特異性的 EV 檢測和表面蛋白分析策略

8.Tumor-Associated Extracellular Microvesicles with Fluorine-Modified Carbohydrate Antigens Trigger a Stronger Antitumor Immune Response. 

具有氟修飾碳水化合物抗原的腫瘤相關細胞外微泡觸發更強的抗腫瘤免疫反應

[ACS Appl Mater Interfaces] PMID: 37589474

摘要：異常糖基化是腫瘤开展的標誌，腫瘤相關碳水化合物抗原是腫瘤治療的潛在免疫靶點。腫瘤相關細胞外微泡是從細胞膜釋放的亞細胞囊泡，具有與前體細胞相似的免疫原性。然而，未經修飾的腫瘤來源微泡存在免疫原性低、生物穩定性差、體內半衰期短等弱點。韦德国际首次顺利获得代謝寡糖工程策略，利用氟修飾的單糖底物構建具有高表達抗原加工酶的細胞系，從而產生含有修飾的腫瘤相關糖抗原的細胞外微泡。將微泡應用於腫瘤免疫，達到增強免疫預防和免疫治療效果。此外，還探討了抗腫瘤免疫機制。韦德国际的研究結果可能為適當修飾的細胞外微泡的粘附和開發更有效的基於碳水化合物的抗癌疫苗给予新的見解。

9.Asymmetrically split DNAzyme-based colorimetric and electrochemical dual-modal biosensor for detection of breast cancer exosomal surface proteins. 

基於不對稱分裂 DNAzyme 的比色和電化學雙模式生物傳感器用於檢測乳腺癌外泌體表面蛋白

[Biosens Bioelectron] PMID: 37542978

摘要：外泌體表面蛋白可能有助於乳腺癌診斷和風險分析。然而，一些涉及複雜操作和昂貴儀器的檢測技術僅限於推進到臨床應用。為分析決這個問題，韦德国际開發了一種雙模態傳感器，結合裸眼檢測和乳腺癌外泌體表面蛋白的電化學測定。現有的傳感器大多數依靠適配體識別外泌體並同時產生放大信號，這需要精心設計的適配體探針以避免識別外泌體的困難。在韦德国际的工作中，未與外泌體結合的適體可以作為完整的模板來誘導 G 四鏈體的形成。G-四鏈體/血紅素脫氧核糖核酸酶催化底物的過氧化物酶活性可以產生顏色和電化學信號。開發的雙模傳感器具有顺利获得分析外泌體表面蛋白來區分非轉移性、轉移性乳腺癌患者和健康個體的卓越能力。該傳感器的獨特特徵，包括其通用性、簡單性和成本效益，使其成為乳腺癌研究和臨床實踐中一種有前景的診斷工具。

10.Dual-Wave Acoustofluidic Centrifuge for Ultrafast Concentration of Nanoparticles and Extracellular Vesicles. 

用於超快速濃縮納米顆粒和細胞外囊泡的雙波聲流控離心機

[Small] PMID: 37118859

摘要：細胞外囊泡（EV）是分泌的納米結構，在關鍵的癌症過程中發揮着各種作用。它們作為細胞間通訊系統發揮作用，將複雜的生物分子從一個細胞轉移到另一個細胞。EV 的濃度操作非常複雜，並且對改進（更快、更簡單、更溫和）的方法從複雜基質中分離EV 的技術需求尚未得到滿足。在此，提出了基於壓電基板上安裝有叉指電極的薄膜印刷電路板的細胞外囊泡（ACEV）的聲流濃縮。在電極和壓電基板的參考平面之間確定120°的角度，以同時產生瑞利波和剪切水平波。雙波在液滴中產生複雜的聲場，從而有效濃縮納米顆粒和EV。ACEV 能夠在 105 秒內濃縮 20 nm 納米球，並在大約 30 秒內濃縮來自人類前列腺癌 (Du145) 細胞系的四種 EV 稀釋液。冷凍電子顯微鏡證實了 EV 完整性的保存。ACEV 設備具有徹底改變EV研究的巨大潛力。其更快、更簡單、更溫和的 EV 分離和濃縮方法可以節省 EV 表型和功能研究的時間和精力。

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