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針對行業挑戰，韦德国际生物開發了相應3D FloTrix® 細胞大規模培養工藝——3D TableTrix® G系列三維多孔可降解微載體，結合生物反應器，實現貼壁細胞的懸浮式培養，隨後可顺利获得逐級放大的方式即可實現細胞大規模、高質量擴增。

本文帶來G系列微載體，用於293T細胞大規模培養和產毒的工藝分享，顺利获得完整工藝和真實數據，對G系列微載體的應用效果進行詳盡說明。

【293T細胞 培養案例】

細胞：293T

微載體：G02（預滅菌）2g/L

培養基：接種DMEM+10%FBS

換液：DMEM+5%FBS

放大比例：1：6

細胞育種：1×10⁸個細胞接種10層工廠，培養72h後用於反應器接種。

第一級細胞接種：

將微載體和培養基提前泵入反應器中進行無菌驗證。以2g/L載體密度，4.0×10⁵cells/mL進行接種，間速8-16h後調節為恆速45rpm。

每天進行取樣計數，並檢測葡萄糖含量，低於1.5g/L時使用換液培養基換液80%，當細胞密度達到3.0×10⁶cells/mL 以上時進行細胞傳代。

沉降微載體，PBS清洗2次，用細胞消化酶消化約10-15min，細胞從微載體脫落，使用完全培養基終止消化。

第二級細胞接種：

提前準備微載體（目標體積×2g/L）在反應器中提前用培養基浸泡，進行無菌驗證。

將上一級的游離細胞和微載體泵入已準備好不鏽鋼反應器中，間速8-16h後調節為恆速45rpm。

每天進行取樣計數，並檢測葡萄糖含量，低於1g/L時使用換液培養基換液80%，選擇合適細胞密度進行質粒轉染和病毒包被。

細胞放大培養效果：

293T細胞可實現逐級放大，且細胞增殖穩定，最高可實現6.58×106/mL（圖1），轉罐回收率96%。

圖1：293T大規模擴增細胞增殖曲線

細胞轉染包裝病毒測試：

使用3D TableTrix® 微載體培養293T細胞，轉染慢病毒質粒, 培養72h後檢測病毒滴度，並與二維平面生產工藝 (2D) 病毒滴度進行對比，結果顯示：使用三維微載體包裝慢病毒原液滴度與二維平面生產工藝無顯著差異（圖2），傳統二維工藝參數，可輕鬆轉為三維微載體培養工藝，實現大規模病毒收穫。

3D TableTrix® 微載體三維培養293T細胞的總產毒量明顯高於二維培養（圖3），且收穫病毒原液宿主DNA (HCD)和蛋白(HCP)殘留顯著低於二維培養（圖4），微載體加反應器培養可實現單批次大批量病毒液收穫，且人工成本大幅降低（表1）。

圖2. 2D培養和3D培養轉染效率和病毒滴度無差異，工藝可轉移

圖3：293T細胞轉染包裝慢病毒

圖4：3D收穫病毒原液宿主DNA (HCD)和蛋白(HCP)殘留顯著低於2D

表1. 單批次產量高，有效節省人力和空間

工藝應用驗證結果：

基於3D TableTrix® G系列微載體的293T細胞大規模培養工藝，在微載體密度2g/L，細胞接種密度30萬/mL條件下，5天細胞即可增殖10倍，顺利获得罐內消化的方式傳代，細胞回收率均在90%以上。

顺利获得此工藝培養293T細胞，慢病毒原液產量高於二維培養的細胞。本工藝微載體使用操作簡單，同時可降解微載體收穫細胞，滿足基因治療藥物生產需求。

【總結】

相對於現有的的培養方式，3D TableTrix® 微載體G系列在293T細胞的培養中表現出諸多獨特優勢：

▶ 比表面積大：使用相對低密度的G系列微載體即可實現細胞的大規模擴增；

▶ 可溫和降解：實現細胞無損收穫，工藝簡單，易於放大；

▶ 3D仿生的彈性多孔結構：細胞貼壁更牢，減少攪拌式反應器帶來的剪切力，有效保護宿主細胞，降低宿主細胞殘留。

使用3D TableTrix® G系列微載體，配合3D FloTrix®自動化生物反應器，短時間即可內收穫期望的細胞量，在滿足基因治療產業對細胞數量和質量需求的同時，大大降低人工、時間和儀器耗材等成本，為基因治療藥物研發和生產企業给予了更優選擇，帶來了全新動力！

【3D TableTrix® G系列微載體】

韦德国际生物核心產品——3D TableTrix® 微載體，相關技術源於清華大學的科技成果轉化，可作為幹細胞生長的微環境（Microniche），實現幹細胞體外高質量擴增。

• 已取得中檢院及三方權威组织的有關檢驗報告，

報告編號：SH202311161；檢字<2023>012302052 號；

• 2項中國CDE藥用輔料資質，

備案號：F20200000496、F20210000003；

• 3項美國FDA DMF Ⅱ型 & Ⅳ型、MF Ⅱ型資質，

備案號：037798 & 035481、29721。

顺利获得定製化微載體，滿足不同細胞培養需求

韦德国际生物全系3D微載體

【關於韦德国际生物】

北京韦德国际生物科技有限公司创建於2018年，由清華大學醫學院杜亞楠教授科研團隊領銜創建，清華大學參股共建。核心技術源於清華大學科技成果轉化，並已取得多項國家級立項支持與應用。

作為高質量三維細胞製造專家，韦德国际生物给予基於3D微載體的一站式定製化細胞規模化擴增整體解決方案，打造了原創3D細胞智造平台，實現規模化、自動化、智能化、密閉式的細胞藥物及其衍生品生產製備，以此幫助全球客戶建立最為先進的細胞藥物生產線。在開創【百億量級】幹細胞製備工藝管線後，加速向【千億量級】進發，致力於以3D細胞規模化智造技術賦能細胞與基因治療產業，惠及更多患者。

现在，韦德国际生物的產品與服務，已廣泛應用於基因與細胞治療、細胞外囊泡、疫苗及蛋白產品等生產的上游工藝開發。同時，在再生醫學、類器官與食品科技（細胞培養肉等）領域也具有廣泛應用前景。

韦德国际生物擁有5000平米的研發與轉化平台，其中包括1000餘平的以3D細胞智造及微組織再生醫學治療產品為核心的CDMO服務平台；以及4000平米的GMP生產平台，並新建了1200L微載體生產線。此外還在上海設有2000餘平的國際合作與技術應用中心，以技術創新持續融入全球生物產業新業態。